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如何利用STR分析法監測細胞株的遺傳穩定性?

原載自:www.huanhen.cn[行情動態]  2024-12-16  瀏覽次數:582

  在細胞生物學研究、生物制藥等眾多領域,細胞株的遺傳穩定性至關重要。STR分析法作為一種強有力的工具,能夠有效地對細胞株的遺傳穩定性進行監測。
  STR即短串聯重復序列,是廣泛分布于人類基因組中的一類高度多態性的遺傳標記。其核心原理在于,這些短串聯重復序列的重復單元數量在不同個體或細胞株中存在差異。在利用STR分析法監測細胞株遺傳穩定性時,首先要從細胞株中提取高質量的基因組DNA。這一提取過程需要嚴格遵循標準化的實驗操作流程,以確保所提取DNA的純度、完整性和濃度符合后續分析要求。例如可采用經典的酚-氯仿抽提法或商業化的DNA提取試劑盒,后者因其操作簡便、高效且能有效減少污染而被廣泛應用。
  提取到DNA后,針對特定的STR位點進行PCR擴增。選擇合適的STR引物是關鍵步驟,這些引物應能夠特異性地結合到目標STR位點的側翼序列,從而在PCR反應中高效地擴增出相應的STR片段。PCR反應體系的優化也不容忽視,包括反應緩沖液的組成、Taq酶的活性、dNTP的濃度以及引物的用量等,都需要經過精心調試,以保證擴增反應的特異性、靈敏度和重復性。
  擴增完成后,對PCR產物進行電泳分離和檢測。常用的檢測方法有毛細管電泳法,它能夠精確地分離不同長度的STR片段,并通過檢測其熒光信號強度來確定各STR片段的相對含量。在毛細管電泳圖譜中,每個STR位點會呈現出特定的峰型,峰的位置對應著STR片段的長度,峰的高度或面積則反映了該STR片段的相對豐度。
  通過比較不同傳代次數細胞株的STR圖譜,可判斷細胞株的遺傳穩定性。如果在傳代過程中,細胞株的STR圖譜保持基本一致,即各個STR位點的峰型、峰位和峰面積沒有明顯變化,那么說明該細胞株具有較好的遺傳穩定性。反之,如果出現新增峰、峰的位移或峰面積顯著改變等異常情況,則提示細胞株可能發生了遺傳變異,如基因突變、染色體畸變或外源基因整合等。
  在生物制藥領域,利用STR分析法監測細胞株遺傳穩定性尤為重要。如在生產單克隆抗體的雜交瘤細胞株培養過程中,遺傳穩定性的保持直接關系到抗體的質量和產量。通過定期對細胞株進行STR分析,能夠及時發現并排除遺傳不穩定的細胞株,確保生產用細胞株始終保持優良的遺傳特性,從而為生物制藥的質量控制提供堅實的保障。
  STR分析法憑借其高靈敏度、高分辨率和良好的重復性,成為監測細胞株遺傳穩定性的重要手段,在細胞生物學研究和生物制藥等領域發揮著重要的作用,有助于推動相關領域的科學研究和產業發展朝著更加精準、高效的方向邁進。

 

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